Identificación molecular de aislamientos de Moniliophthora roreri en huertos de cacao de Norte de Santander, Colombia

Abstract

El hongo fitopatógeno Moniliophthora roreri produce la moniliasis, una enfermedad que destruye la mazorca de cacao (Theobroma cacao L.) y, por tanto, reduce la producción del cultivo y los ingresos de los agricultores. En el departamento de Norte de Santander, Colombia, las pérdidas por esta enfermedad pueden alcanzar hasta 60% de la producción. El conocimiento sobre la biología del hongo es escaso y actualmente se están realizando estudios de identificación macroscópica, microscópica, y comportamiento in vitro frente a antagonistas como: Trichoderma asperellum, T. longibrachiatum, Paecilomyces sp. y Bacillus brevis. En ocho municipios y corregimientos del departamento (El Zulia, Cúcuta, Tibú, Sardinata, Bucarasica, Teorama, Agua clara y El Tarra) se obtuvieron 56 aislamientos de M. roreri con fines de extracción de ADN y análisis de PCR. El método de aislamiento se realizó a partir de mazorcas infectadas por M. roreri, las cuales fueron lavadas con agua destilada, fraccionadas en trozos de 2 x 2 cm y desinfestadas con hipoclorito de sodio (2.5%), y alcohol (60%), antes de la siembra en cajas de Petri con medio PDA e incubación por 10 días a 28 °C. Las regiones ribosomales, ITS, (espaciadores internos de transcritos) correspondientes al ADNr 18S, ITS1, 5.8S, ITS2 y 25S fueron amplificadas y secuenciadas. Amplicones de 600 pb (8 aislamientos), 740 pb (12 aislamientos) y de 750 pb, para los 36 aislamientos restantes. Los tamaños de los amplicones correspondieron a los esperados para la especie M. roreri y los análisis de BLAST confirmaron este nivel de caracterización.

The plant pathogenics fungus Moniliophthora roreri, causes losses to cocoa farmers and it causes the “Moniliasis”, too. The disease destroys the cocoa pod and crop production decreases, the losses reach up to 60% in the department of Norte de Santander. Little is known of the biology of the fungus, studies are currently identifying macroscopic, microscopic, and behavior in vitro with antagonists such as Trichoderma asperellum, Trichoderma longibrachiatum, Paecilomyces sp. and Bacillus brevis. Fifty-six isolates of M. roreri were obtained from 8 municipalities and townships the department (El Zulia, Cucuta, Tibú, Sardinata, Bucarasica, Teorama, Agua clara, El Tarra) for the purpose of DNA extraction and PCR analysis. The method of isolation was performed from infected ears M. roreri, which were washed with distilled water, and cut into 2 x 2 cm, and were disinfected with hypochlorite, 2.5% sodium and 60% alcohol. Then sown in Petri dishes containing PDA medium and incubated for 10 days at 28 ° C. Ribosomal regions “ITS” (internal transcribed spacers) for the 18S rDNA, ITS1, 5.8S, ITS2 and 25S, were amplified and sequenced. Amplicons of 600 bp (8 isolates), 740 bp (12 isolates) and 750 bp for the remaining 36 isolates. The sizes of the amplicons corresponded to those expected for the species M. roreri, and analysis “BLAST” level confirmed this characterization.