Evaluación del efecto de nanopartículas de plata (AgNPs) como agente antiviral contra el virus de la mancha anular (PRSV) en plantas de papaya

Ortiz Rojas, luz Yineth; Chaves Bedoya, Giovanni

dc.contributor.author	Ortiz Rojas, luz Yineth
dc.contributor.author	Chaves Bedoya, Giovanni
dc.date.accessioned	2025-05-29T16:25:19Z
dc.date.available	2025-05-29T16:25:19Z
dc.date.issued	2022
dc.identifier.uri	https://repositorio.ufps.edu.co/handle/ufps/9584
dc.description.abstract	Las enfermedades en plantas constituyen uno de las mayores limitantes para la producción agricola. Ei virus de la mancha anular de la papaya (PRSV) con amplia presencia en ei departamento de Norte de Santander, es un miembro del género Potyvirus transmitido por pulgones, es la causa de una enfermedad destructiva y un factor limitante importante para el cultivo de papaya y cucurbitáceas en todo el mundo. En la actualidad no existen tratamientos eficaces para esta enfermedad, por lo que deben desarrollarse nuevos metodos para su control. En este sentido es necesario la exploración y desarrollo de nuevas alternativas que limiten el desarrollo de la virosis. Por consiguiente, en esta propuesta de investigación buscamos evaluar la eficiencia de las nanopartículas de plata AgNPs en la supresión o control del virus en plantas de papaya tratadas con diferentes concentraciones aplicadas a la planta 24 horas antes de la inoculación y evaluar cuál de las concentraciones ensayadas presenta mejor efecto sobre el desarrollo de la enfermedad. Lo anterior se realizara mediante el empleo de diferentes tecnicas moleculares y/o bioquímicas como RT-PCR, Elisa y ensayos de expresión enzimática. Así mismo se realizarán observación con microscopia electrónica de transmisión (TEM) para ver lo que sucede con las nanopartículas de plata y las partículas virales. Con lo anterior se espera obtener resultadas a partir de los cuales se puedan proponer y desarrollar nuevos métodos de control de PRSV en plantas de papaya.	spa
dc.description.sponsorship	Fondo de Investigaciones Universitarias - FINU - UFPS.	spa
dc.format.extent	35 páginas. ilustraciones, 4.100 KB	spa
dc.format.mimetype	application/pdf	spa
dc.language.iso	spa	spa
dc.publisher	Universidad Francisco de Paula Santander	spa
dc.rights	Derechos Reservados - Universidad Francisco de Paula Santander, 2022	spa
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/	spa
dc.title	Evaluación del efecto de nanopartículas de plata (AgNPs) como agente antiviral contra el virus de la mancha anular (PRSV) en plantas de papaya	spa
dc.type	Propuesta de investigación	spa
dcterms.audience	Investigadores en virología, nanotecnología y microbiología, estudiantes y docentes de programas en Biología, Química, Medicina y Bioingeniería, grupos de investigación en terapias antivirales y desarrollo de nanomateriales, entidades públicas y privadas interesadas en innovación en salud pública, así como organismos de control sanitario y laboratorios dedicados al estudio de agentes infecciosos emergentes.	spa
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dc.contributor.corporatename	Universidad Francisco de Paula Santander	spa
dc.contributor.researchgroup	FITOBIOMOL	spa
dc.contributor.supervisor	Vergel Ortega, Mawency
dc.description.funder	Mediante la resolución 125 de 24 de mayo de 2011 se reglamenta los criterios y procedimientos para la financiación de los proyectos de investigación a través del Fondo de Investigaciones Universitarias - FINU - UFPS.	spa
dc.description.methods	4.6.1. Material vegetal. La siembra de semilla de Carica papaya de la variedad maradol se realizará directamente en bolsas de polietileno de 20 x14 cm, calibre 1 bajo condiciones controladas en cámara de crecimiento a 25°C. 30-45 días después de la siembra las plántulas de tamaño uniforme se seleccionarán para el experimento. 4.6.2. Fuente del inoculo viral. La fuente del inoculo viral se hará a partir de plantas colectadas en campo abierto en el municipio de Villa del Rosario o Cúcuta que presenten lo síntomas aparentes de PRSV. Las muestras de hojas se analizarán inicialmente empleando un ensayo inmunoenzimático de doble anticuerpo (DAS-ELISA) con anticuerpos específicos de PRSV. Las muestras positivas que reacciones con los anticuerpos se emplearán como inoculo viral. 4.6.3. Identificación molecular de PRSV. El ARN total se aislará a partir de 50 mg de hoja de papaya sintomática y verificada por DAS- ELISA empleando el reactivo TRIzolTM de Invitrogen siguiendo las indicaciones del fabricante. La transcripción reversa se hará con la enzima transcriptasa reversa de BioLabs New England empleando el primer específico para la región CP con secuencia 5’- TTTTTTTTCTCTCATTCTAAGAGGCTCG ́. El ADN complementario se amplificará con los oligos directo 5’-GTCATGGGGATATGGGGAGTTAACACA-3’ y reverso 5’-TTTTTTTTCTCTCATTCTAAGAGGCTCG-3’. en un volumen de reacción de 25 uL siguiendo el procedimiento previamente reportado (Chaves-Bedoya and Ortiz-Rojas 2015).El producto de PCR obtenido se correrá en un gel de agarosa al 1.5% con buffer TAE a 45 minutos y 80V, teñido con GelRed (Biotum). La banda de ADN será visualizada bajo luz ultravioleta (UV) a una longitud de onda de 254nm y fotografiada empleando un sistema UVP DigiDoc-It 4.6.4. Tratamiento foliar con AgNPs Las nanopartículas de plata se sintetizarán de acuerdo a (Padilla-Sierra et al., 2021). Las plántulas de papaya en una cámara de crecimiento en un ambiente a prueba de insectos serán tratadas con las AgNPs a concentraciones de 50, 60, 150 y 250 ppm. La aplicación foliar se hará en esquema de protección 24 horas antes de la inoculación viral. Cada planta será rociada hasta escorrentía. 4.6.5. Evaluación de la enfermedad La severidad de la enfermedad será evaluada tres semanas después empleando una escala numérica de la siguiente manera: 0= para plantas sin síntomas, 1= para plantas con síntomas leves de mosaico 2= para síntomas intermedios del mosaico y poca deformación de la hoja y 3= para aquellos que presentan síntomas de mosaico severos, deformaciones intensas de las hojas y desarrollo reducido.(Sansini and Marques 2008). La severidad de la enfermedad (SE) se estimará de acuerdo a la siguiente fórmula (Yang et al., 1996). (SE)= ∑ (grado de enfermedad x número de plantas en ese grado) x 100 número total de plantas x grado de enfermedad más alto 4.6.6. Detección de PRSV por ELISA (Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas con doble anticuerpo en sándwich) Las hojas nuevas que emerjan 30 días post inoculación se analizaran para PRSV empleando el método DAS-ELISA. Cuatro hojas de cada concentración de AgNPs y control sin tratamiento serán analizadas. La reacción de color se leerá a 405 nm en una microplaca. Las muestras que presenten valores de absorbancia al menos dos veces mayor que el control sin inocular se consideraran positivas. El porcentaje de inhibición de la replicación viral en plantas tratadas con las AgNPs se calculará con base en las diferencias colorimétricas comparadas con las plantas de control no tratadas. El índice de inhibición viral se medirá de acuerdo a la siguiente formula (El Gamal et al., 2022): Índice de inhibición viral (%) = C-T x 100 C Donde C es el promedio de A405 en plantas de control no tratadas y T es el valor medio de A405 para cada grupo de tratamiento con AgNPs. La preparación de las muestras se hará según lo reportado (El Gamal et al., 2022) y se enviaran a analizar al laboratorio de microscopia electrónica de transmisión de la UNAL, en Bogotá. 4.6.7. Ensayos de actividad enzimática La actividad de la peroxidasa oxidasa y polifenol oxidasa se realizara de acuerdo a la metodología descrita (Kar and Mishra 1976) a diferentes (0, 24, 48, 72, 96, 120, y 144 h) después de rociar las plantas con AgNPs. La actividad peroxidasa se estimará midiendo la oxidación de pirogalol a pirogalina en presencia de peróxido de hidrogeno a 425 nm. La medición se hará por triplicado. 4.6.8. Microscopia electrónica de transmisión La actividad de las AgNPs en las partículas virales se hará comparando las plantas tratadas a concentración de 200 ppm de AgNPs con el control. El análisis microscópico se contratará con el laboratorio TEM de la Universidad de Antioquia. 4.6.9. Diseño experimental La aplicación de los tratamientos se hará bajo dos condiciones, 1) sin inoculación del virus y 2) con inoculación del virus (PRSV) en plántulas de papaya de 30-45 días. En total son 6 tratamientos. Cada tratamiento consistirá de 5 repeticiones para un total de 30 plántulas. El diseño será en bloques completamente al azar. 4.6.10. Análisis estadístico Los datos del diseño de bloques completamente al azar serán analizados mediante análisis de varianza (ANOVA) con valor de significancia de p=0.05, empleando el software SAS.	spa
dc.description.researcharea	Biología molecular/virología vegetal	spa
dc.publisher.place	San José de Cúcuta	spa
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