Envíos recientes

Evaluation of the Functional and Structural Integrity Cryopreserved Goat Sperm by Commercial Extender

Hernandez-Corredor, Leonardo | 2017-02

Dos experimentos se realizaron para observar los efectos del método de extracción seminal: Electroeyaculador (EE) vs. Vagina Artificial (VA); el diluyente: lecitina de soya (LS), yema de huevo al 6% (YH), lecitina de soya (LS) con mínimo de glicerol (LSbG) y la raza: Alpina (A) vs. Saanen (S) sobre la calidad espermática en semen descongelado de caprino (Capra hircus). Se utilizó la combinación DiOc6 y PI para evaluar por Citometría de flujo la vitalidad espermática (V) y el daño mitocodrial (AM). Mediante el Análisis Computarizado de la Motilidad espermática (CASA) se valoró el movimiento espermático (MOT) y progresividad de los espermatozoides (PROG), además de evaluar la integridad de la membrana acrosomal (IMA) en muestras seminales de macho cabríos. En el primer experimento no se evidenciaron diferencias debidas al método de extracción seminal ni a los diluyentes utilizados (P≥0,05), sin embargo, en el segundo experimento el diluyente LS supera (P≤0,05) a YH en los parámetros estudiados, MOT (56,60 % Vs 39,66 %) y PROG (33,31 % Vs 17,72 %). El efecto raza (A Vs S) también se evidenció (P≤0,05), solo con el uso del diluyente LS (V: 28,78 Vs 62,97 %). Los resultados indican que la LS mostró una mayor protección de los espermatozoides caprinos frente al proceso de criopreservación, comparándolo con YH, del mismo modo, las muestras seminales de la raza S demostraron ser más resistentes a los procesos de criopreservación.

Efecto de la colchicina sobre la morfología foliar y los estomas de Kalanchoe daigremontiana Raym.-Hamet & H.Perrier (Crassulaceae)

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2018

El presente estudio evaluó el efecto de diferentes concentraciones y tiempo de exposición de colchicina, sobre la morfología foliar y los estomas de Kalanchoe daigremontiana. Inicialmente, se recolectaron y se sometieron las plántulas de K. daigremontiana a concentraciones de 0,025% y 0,1% (p/v) de colchicina y a dos tiempos de exposición (24 y 48 horas). Posteriormente, se realizaron estudios morfológicos como la altura de la planta (AP), anchura de la hoja (AH), número de hojas (NH), longitud foliar (LH), espesor de hoja (EH) y volumen foliar (VH) cada 15 días, durante 16 semanas después de la siembra. Luego, se caracterizaron los estomas, teniendo en cuenta el ancho, el largo, índice estomático y el número de cloroplasto por estoma. Se encontró un incremento significativo en la morfología foliar y estomática, en los tratamientos con colchicina de 0,025% a 24 y 48 horas. Lo que demuestra que el uso de la colchicina logra un mayor crecimiento en poco tiempo y aumento de la biomasa en la planta medicinal K. daigremontiana.

Evolutionary Relationships of the Fish Prochilodus reticulatus and Prochilodus magdalenae (Characiformes: Prochilodontidae)

Vega, Nelson | 2018-04-05

A phylogenetic study was carried out between the species Prochilodus reticulatus (Valenciennes, 1850) and P. magdalenae (Steindachner, 1879) of great socioeconomic value in the country. Initially, the species were collected for DNA extraction and subsequent characterization by RAPD-PCR to establish their phylogenetic relationships using the Jaccard coefficient and the UPGMA method. The phylogenetic analysis of P. reticulatus and P. magdalenae showed a close genetic relationship, which suggests that the differences found between them may not be considered significant.

Evaluación de la calidad fisiológica de las semillas de Linum usitatissimum L. con la prueba de tetrazolio

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2018-12

La linaza es una planta herbácea de la familia de las lináceas que corresponde a la semilla del lino (Linum usitatissimum L.) utilizada tradicionalmente como oleaginosa. El interés por estas semillas aumenta por el reconocimiento de algunos de sus componentes con potenciales beneficios para la salud. En este estudio se determinó la eficacia de la prueba de viabilidad de tetrazolio en semillas de L. usitatissmum. En consecuencia, se sometieron semillas de L. usitatissmum a cuatro tratamientos, los cuales consistieron en dos concentraciones (0.5 % y 1 %) y dos tiempos de exposición (24h y 48h). Posteriormente, se evaluó la tinción de las semillas con la ayuda de un microscopio estereoscopio, tomando como semillas viables las que presentaron coloración roja en el embrión, de esta forma se pudo obtener diferencias estadísticamente significativas (P ≤ 0,05: Tukey HSD) para el tratamiento T1 (0.5 %, 24h) con un 65% de semillas viables. Del mismo modo, no se observaron diferencias entre los tratamientos T2 (1 %, 24h), T3 (0.5 %, 48h) con viabilidad del 86% y T4 (1 %, 48h) con 89 % de viabilidad. En cuanto a la prueba de germinación, en promedio se obtuvo un 86 % en las cinco repeticiones con una desviación estándar de 9.63. Se concluye que la evaluación de la viabilidad en semillas de linaza mediante ensayo de tetrazolio es eficiente para las concentraciones de 1 % durante 24 y 48 horas y para 0.5 % a 48 horas de exposición.

Cytotoxic evaluation of sodium hypochlorite, using Pisum sativum L as effective bioindicator

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2019-05-30

Cytotoxic evaluation of glyphosate, using Allium cepa L. as bioindicator

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-01-15

Glyphosate is a chemical compound used mainly as a broad spectrum herbicide, it is recognized for its proven effectiveness and easy handling. It represents more than 60% of the world market of non-selective herbicides and is used in both agricultural fields and family gardens. The present study was designed to test the cytogenotoxic potential of glyphosate using the Allium cepa test as toxicity bioindicator. Consequently, bulbs of A. cepa were exposed to different concentrations of glyphosate (5, 10, 15, 25 and 30 mgL−1) and a control (deionized water), for 72 h; root development was also studied in this period of time. The cytogenotoxic potential of glyphosate was determined by calculating the mitotic index (MI), cellular anomalies (CA) and registering the roots longitudinal growth at 24, 48 and 72 h. Regarding root development, a greater growth was observed in the control treatment in the three measurement times. The mitotic phases analysis, determined that the higher the concentration, the lower the mitotic index, in addition the inhibition of the telophase Mitotic Index (TMI) was observed in any of the concentrations. The results indicate that the exposure to glyphosate of A. cepa meristematic cells induces diverse types of chromosomal anomalies, such as micronuclei (MN), chromosome breaking (CB), nuclear notch (Nn), among others. Therefore, in demonstrates that glyphosate has a highly cytogenotoxic effect for any of the concentrations used.

Pre-treatments effect on the tetrazolium test on Epidendrum barbaricum Hágsater & Dodson seeds

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-03-17

Orchids are affected by several factors that impair their spreading, which is necessary to know the viability of their seeds. The aim of this research was to determine the most suitable preconditioning treatment to potentiate the tetrazolium test in Epidendrum barbaricum seeds. Initially, the mature capsules were collected near the city of Pasto in the Department of Nariño (Colombia), and seeds were obtained. Subsequently, the seeds were submitted to four pretreatments: immersion in distilled water, 1% hypochlorite, 10% alcohol and 10% sucrose. Seeds were then rinsed with distilled water and exposed to two concentrations of 2,3,5-trifenyl tetrazolium chloride (0.25%, 1%) and different exposure times (6, 12, 24, and 48 hours). To perform the tests, the 5 ml syringe with cloth filter method was used. The viability test results were corroborated with the in vitro germination test, using the MS (Murashige and Skoog) culture medium. The most reliable viability findings (93%) were obtained by using preconditioning with sodium hypochlorite, a value that has a high correlation with the percentage of germination (93%), independent of the tetrazolium concentration at an exposure time of 24 hours.

Improvement of the methodology of the tetrazolium test using different pretreatments in seeds of the genus Epidendrum (Orchidaceae)

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-04-03

The aim of the present study was to determine the most suitable pretreatment to enhance the tetrazolium test in seeds of the Epidendrum genus. Initially, mature capsules were harvested at El Escorial village, in the municipality of Pamplona, Colombia. Subsequently, the seeds were subjected to five pretreatments: deionized water, 0.5% NaClO, 1.0% NaClO, 10.0% sucrose and a control group. Using the syringe method with cloth filter, the seeds were rinsed with distilled water and subjected to two concentrations of tetrazolium solution (0.25%, 1.0%) and three exposure times (6 h, 24 h and 48 h). Finally, the tetrazolium viability test results were correlated with the in vitro germination test. It was found that the use of deionized water improves the efficiency of the tetrazolium test in seeds of Epidendrum fimbriatum and E. microtum; as in seeds of E. elongatum when using 1.0% tetrazolium for 24 h. Similarly, a high correlation was found between viability and germination, using deionized water and 10.0% sucrose, with homogeneous results with each other.

Evaluación de métodos para la inoculación y diagnóstico del virus del mosaico del pepino (CMV)

Villegas-Estrada, Bernardo | 2020-07-01

El virus del mosaico del pepino (CMV) es un agente limitante en la producción y calidad de cultivos agrícolas cuya inoculación efectiva y diagnóstico confiable son esenciales para implementar estrategias de manejo adecuadas y oportunas. Se evaluaron dos protocolos para la inoculación del CMV en plantas indicadoras (Nicotiana benthamiana y N. tabacum cv. Xanthi) y diferentes métodos de detección de este virus. La infección de plantas con CMV se logró mediante transmisión mecánica e infiltración. La presencia del virus se confirmó mediante la expresión de síntomas, serología (ImmunoStrip®), RT-PCR y por secuenciación. Los resultados confirmaron la efectividad del método de transmisión mecánica, en el cual, las plantas infectadas presentaron sintomatología asociada con el virus 15 días después de su inoculación. La prueba serológica permitió detectar la presencia del patógeno solo en las plantas de N. benthamiana, mientras que la prueba de RT-PCR en todas las plantas evaluadas. Los resultados de secuenciación mostraron altos valores de identidad nucleotídica con las secuencias reportadas en el NCBI para este virus. La transmisión mecánica fue el método más efectivo para la inoculación del CMV y las técnicas de análisis molecular fueron más sensibles y confiables para su identificación, en comparación con la prueba serológica.

Implementación de la prueba de tetrazolio en las semillas de Raphanus sativus L

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-08-14

El Rábano (Raphanus sativus) es una especie de gran importancia por sus propiedades nutricionales, el alto porcentaje de aceite en sus semillas y la gran cantidad de metabolitos aprovechables. La producción de este cultivo se ve influenciada por factores como la utilización de semillas de alta o baja calidad. Es por esto que, en este estudio, se evaluó la aplicación del test de tetrazolio como método para determinar la viabilidad en semillas de Raphanus sativus. Inicialmente, se recolectaron semillas producidas en Villa del Rosario, Norte de Santander, Colombia, las cuales fueron expuestas a dos concentraciones (0,5 % y 1,0 %) y dos tiempos de exposición (24 y 48 horas). Posteriormente, fueron observadas en el estereoscopio para determinar el porcentaje de viabilidad, contabilizando las semillas que presentaron intensa coloración roja en su embrión; se obtuvieron un 99 % y 97 % de semillas viables con los tratamientos T2 (0,5 %, 24 h) y T4 (0,5 %, 48 h) respectivamente, no existiendo diferencias estadísticamente significativas entre sí (p ≤ 0,05: Tukey hsd). En comparación con la prueba de germinación, en la que se obtuvo un promedio de 99 %, no presentaron diferencias estadísticamente significativas los tratamientos T2, T3 y T4. Se concluyó con esto que la prueba de viabilidad con tetrazolio es efectiva a concentraciones de 0,5 % y 1,0 %, durante tiempos de exposición de 24 y 48 horas.

Optimización de la prueba de tetrazolio para evaluar la viabilidad en semillas de Solanum lycopersicum L.

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-08-31

El tomate (Solanum lycopersicum) es una de las hortalizas más consumidas en el mundo con un aumento en su demanda, por lo que conocer la viabilidad de sus semillas es de suma importancia, ya que estas son la base del éxito de su producción. Debido a esto, el presente estudio tuvo como objetivo optimizar la prueba de tetrazolio determinando el pretratamiento adecuado para potenciar la prueba. El material vegetal se recolectó de cultivos establecidos en el municipio del Cáchira, departamento de Norte de Santander, Colombia. Las semillas se extrajeron de los frutos maduros y, posteriormente, se expusieron a pretratramientos con hipoclorito de sodio y agua destilada durante 10 minutos, con tres concentraciones de 2, 3, 5- cloruro trifenil tetrazolio (0,25 %, 0,15 % y 0,10 %) y distintos tiempos de exposición (6 h, 12 h y 24 h). Los datos de viabilidad obtenidos se corroboraron mediante la prueba de germinación en toallas de papel húmedas. Los resultados de viabilidad más relacionados con la prueba de germinación se obtuvieron al emplear las concentraciones de 0,25 % y 0,15 %, utilizando tanto el pretratamiento con hipoclorito de sodio como la inmersión en agua destilada.

Effect of the medium composition on the asymbiotic germination and in vitro development of the Laeliocattleya hybrid

SALAZAR MERCADO, SEIR ANTONIO | 2020-09-04

In vitro cultivation techniques are viable alternatives for the germination and production of orchid seedlings in a short period. From another perspective, when studying the optimal germination conditions, knowing about the seeds viability is essential. Therefore, this research aimed to study the appropriate medium for germination and in vitro development of xLaeliocattleya Richard Muller. In addition, optimal preconditioning was determined to enhance the tetrazolium test. Initially, the indehiscent capsules were collected in a nursery in Bochalema-Norte de Santander. From them, seeds were obtained for the preconditioning and germination tests. One portion was subjected to different precondition treatments: distilled water, sodium hypochlorite (0.5 1.0%) and sucrose (10%). Afterwards, seeds were rinsed and exposed to different concentrations and exposure periods of tetrazolium. Regarding in vitro cultivation, the commercial medium Orchid Seed Sowing Medium, Murashige & Skoog (MS), and the MS supplemented with coconut water (MSC), pineapple juice (MSP) and gibberellic acid (MSGA3) were evaluated. The highest percentage of viability was obtained by subjecting the seeds to preconditioning with 10% sucrose and keeping them for 24 h in a 0.5% tetrazolium solution. With respect to the MS media used, those enriched with organic supplements proved to be superior to the other treatments since the highest results were achieved both in asymbiotic germination (56 § 2.8%) and in seedlings formation (25.8 § 0.8) with the MSP medium, followed by the MSC medium. In this way, a viable and low-cost alternative is offered for the commercial propagation of xLaeliocattleya Richard Muller.

Efecto de criopreservación sobre la morfometría de la cabeza espermática en semen de caprinos

Hernandez-Corredor, Leonardo | 2021-03-16

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de los cambios de temperatura durante el proceso de criopreservación sobre las dimensiones y la forma de la cabeza espermática en semen de caprinos. Se evaluaron 56 eyaculados de 7 machos cabríos de reconocida fertilidad utilizando el sistema de Análisis Computarizado de la Morfometría Espermática (ASMA), determinando: Longitud (L), Ancho (W), Área (A), Perímetro (P), Elipticidad (E), Rugosidad (R), Elongación (El), Regularidad (RE) y el factor de forma de la cabeza espermática (P2A). Los parámetros obtenidos se analizaron mediante el procedimiento FASTCLUS para obtener las subpoblaciones espermáticas (SP) y su porcentaje en cada fase del proceso. En semen recién colectado, la SP1 estuvo representada por los espermatozoides (SPZ) de mayor longitud (35,12%), la SP2 con espermios de mayor anchura y menor elipticidad (36,81%), la SP3 obtuvo medidas promedio (9,58%), mientras que SP4 contenía los espermios más pequeños (18,48%). Durante el proceso de refrigeración, la SP1 (32,93%) mostró SPZ de mayor longitud, la SP4 (18,54%) pequeños, no obstante, la SP3 (12,88%) es más parecida a la SP1, y la SP2 (35,66%) presenta espermios no hidrodinámicos (muy anchos). Al descongelar, la SP2 (33,12%) presentó espermios de mayor anchura, la SP1 (30,92%) espermios de mayor longitud y elípticos (hidrodinámicos), la SP3 (14,43%) es parecida a la SP1 y la SP4 (21,53%) se caracteriza por presentar células pequeñas. Se observaron efectos mínimos del proceso de criopreservación sobre la morfometría espermática en el semen caprino, hecho comprobado al observar la frecuencia de distribución de espermios y las características de sus formas para cada SP. La estructura de la SP se mantuvo relativamente constante después del periodo de refrigeración y del almacenamiento en nitrógeno líquido. En conclusión, la criopreservación no modificó sustancialmente los parámetros específicos como la distribución de los SPZ dentro de las SP (menos del 5% de cambios).

Foliar Infiltration of Virus-Derived Small Hairpin RNAs Triggers the RNAi Mechanism against the Cucumber Mosaic Virus

Villegas Estrada, Bernardo | 2022-04-29

Post-transcriptional gene silencing (PTGS) is an evolutionarily conserved plant defense mechanism against viruses. This paper aimed to evaluate a dsDNA construct (77 bp) as a template for in vitro production of virus-derived artificial small hairpin RNAs (shRNAs) and test for their potential to trigger the RNAi mechanism in Nicotiana benthamiana plants against CMV after their foliar infiltration. This approach allowed for the production of significant amounts of shRNAs (60-mers) quickly and easily. The gene silencing was confirmed using polymerase chain reaction (PCR), immunological-based assays, and real-time PCR (qPCR). The highest levels of gene silencing were recorded for mRNAs coding for replication protein (ORF1a), the viral suppressor of RNA silencing (ORF2b), and the capsid protein (ORF3b), with 98, 94, and 70% of total transcript silencing, respectively. This protocol provides an alternative to producing significant shRNAs that can effectively trigger the RNAi mechanism against CMV