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Actualmente se ha elevado el alto uso de técnicas moleculares para diagnostico e investigación, principalmente la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), incrementándose a su vez la demanda de la enzima ADN polimerasa ...

En el presente trabajo se estandarizó el protocolo para la tipificación del alelo HLA B*27 por medio de la técnica de PCR-SSP en mediana resolución e identificación en alta resolución de algunos de los subtipos más ...

Evaluación de la actividad enzimática de la gentaq polimerasa
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Arias Umbarila, Janeth Cristina | 2019

Actualmente se ha elevado el alto uso de técnicas moleculares para diagnostico e investigación, principalmente la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), incrementándose a su vez la demanda de la enzima ADN polimerasa termoestable fundamental para llevar a cabo la replicación del ADN pero su adquisición puede llegar a ser costosa por ser producida y comercializada principalmente por países desarrollados. El objetivo de este proyecto fue evaluar la actividad enzimática de la genTaq polimerasa (enzima ADN polimerasa termoestable nacional) en especies de diferentes reinos con fragmentos de distinto peso molecular. La evaluación se realizó de dos maneras: primero comprobando las concentraciones de los Buffer acompañantes de la enzima y segundo por medio de la amplificación de ADN de las siguientes especies: humano, Vibrio cholerae, Candida auris, Cryptococcus neoformans, Giardia sp y Chikunguña. Se logró apreciar un rango de peso molecular de ADN entre 80 y >1600pb en la cual la enzima actúa sin alterar su actividad de amplificación.

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Tipificación molecular del hla b* 27 mediana y alta resolución mediante pcr-ssp.
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Rojo Orozco, María Alejandra | 2018

En el presente trabajo se estandarizó el protocolo para la tipificación del alelo HLA B*27 por medio de la técnica de PCR-SSP en mediana resolución e identificación en alta resolución de algunos de los subtipos más representativos. Durante el transcurso del proyecto se evaluaron, analizaron y diseñaron los cebadores y mezclas por medio de herramientas bioinformáticas como UGENE, AmplifX y base de datos como IPD-IMGT/HLA, NCBI, OligoAnalyzer y dbMHC. Para la estandarización del protocolo se diseñaron 17 mezclas formadas por 28 cebadores de los cuales 2 fueron tomados de bibliografía y 4 fueron diseñados por bioinformática, los demás cebadores son utilizados para la tipificación completa del locus B e identificados como específicos para el alelo B*27. Todas las mezclas fueron evaluadas por medio de ensayos in Silico y para el diseño del ciclo térmico se tomaron en cuenta parámetros como la Temperaturas Melting y el %GC de los cebadores. La lectura del producto de PCR se realizó por medio de electroforesis en gel de agarosa al 2% con bromuro de etidio como agente intercalante. Los ADN fueron muestra guardas en el laboratorio como control positivo de anteriores trabajos y muestras remitidas al laboratorio para tipificación HLA completa o locus especifico durante el periodo del proyecto. En total se tipificaron molecularmente 30 muestras en mediana resolución es decir solo el diagnostico positivo o negativo para este alelo de las cuales 11 fueron tipificadas en alta resolución encontrando los subtipos B*27:02, B*27:03, B*27 05 y B*27:07. Tipificación certificada y comparada con el kit comercial de OlerupSSP alta resolución B*27.

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