Caracterización Molecular Del Fitopatógeno Moniliophthora Roreri, Utilizando Marcadores Issr, En Norte De Santander, Colombia.

Abstract

Las regiones del departamento de Norte de Santander, Colombia, cultivadores de cacao presentan la enfermedad más grave que es la moniliasis causada por el hongo fitopatógeno Moniliophthora roreri. Inicialmente se llevó a cabo el protocoló de desinfección en la mazorca enferma, se sembró en agar PDA (papa dextrosa), agar PDA modificado (gentamicina y pulpa de cacao) y agar extracto de malta, incubándolo por 10 días a una temperatura de 15°C, mostrando mejor crecimiento en agar PDA. Después se continuó con la extracción de ADN, posteriormente se ratificó la efectividad de muestras conservadas de monilia aisladas en los municipios de El Zulia, Cúcuta, Tibú, Puerto Santander, Bucarasica, El Tarra, Teorama y Sardinata de Norte de Santander, una vez comprobada la presencia de ADN por electroforesis en gel de agarosa, se seleccionaron 24 muestras, luego se estandarizó la técnica de ISSR (inter secuencias repetidas); para el cual se obtuvieron patrones de bandas en la mayoría de las 27 muestras con los cebadores 823, 880, 890 y 891, mientras que con el cebador 816, 874 y 885 generaron muy pocas bandas. Con el empleo de ITS4 y ITS5 se realizó la PCR, los amplicones fueron secuenciados para 2 muestras aisladas del hongo y arrojo: para el hongo HFa007un porcentaje de identidad del 97,08%, Diaporthe pseudomangiferaem y para el hongo HFa009 un porcentaje de 99,29% de identidad para Diaporthe melonis. Se ejecutó el análisis estadístico, donde se obtuvo un dendograma basado en el coeficiente de Dice, el cual mostro las relaciones existentes para las 28 muestras estudiadas. La muestra 6d-17 proveniente de Sardinata se agrupo de forma independiente

The regions of the department of Norte de Santander, Colombia, cocoa cultivatorshave the most serious disease that is the moniliasis caused by the phytopathogenic fungus Moniliophthora roreri. Initially the protocol of disinfection was carried out in the diseased ear, then it is sown in PDA agar (potato dextrose), modified PDA agar (gentamicin and cocoa pulp) and malt extract agar, incubating them for 10 days at a temperature of 15 ° C, showing better growth in PDA agar. After DNA extraction was continued,the effectiveness of conserved samples of isolated monilia in the municipalities of El Zulia, Cúcuta, Tibú, Puerto Santander, Bucarasica, El Tarra, Teorama and Sardinata de Norte de Santander, was later confirmed. the presence of DNA by agarose gel electrophoresis, 24 samples were selected, then standardized the ISSR technique (repeated inter sequences); for which they obtained band patterns in most of the 27 samples with the primers823, 880, 890 and 891, while with primer 816, 874 and 885 they generated very few bands. With the use of ITS4 and ITS5 the PCR was performed,sequencing was carried out on 2 isolated samples of the fungus and yield: for the HFa007 fungus with an identity percentage of 97.08% for Diaporthe pseudomangiferaem and for the HFa009 fungus a percentage of 99.29% Diaporthe melonis. The statistical analysis was executed, where a dendogram based on the Dice coefficient was obtained, which showed the existing relationships for the 28 samples studied. The 6d-17 sample from Sardinata was grouped independently.